▒▒▒▒ 보건복지부 약물대사유전체연구센터 ▒▒▒▒
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유전자발현조절
재조합 대사효소를 이용하여 변이형 효소의 대사활성 변화평가
야생형 및 변이형의 재조합효소는 돌연변이삽입법으로 변이형 플라스미드 제작
1상 효소의 재조합효소는 주로 baculovirus 시스템을 이용
2상 효소의 재조합효소는 진핵세포 발현 plasmid 시스템 및 baculovirus 시스템을 이용
필요시 박테리아 발현 시스템도 이용
대사효소별 특이적 반응 및 기질 검색 후 선별
Promoter 의 변이유전자는 전사조절 인자 데이터베이스 검색으로 기능성을 예측
야생형 및 변이형의 promoter를 진핵세표에 도입하여 promoter 활성 비교
특이한 전사조절인자나 수용체의 결합부위가 있는 경우 외부 자극에 대한 promoter의 반응 정도의 차이 평가
Intronic SNP의 경우 cDNA 및 EST 데이터 베이스 검색으로부터 기능성 예측
유전형에 따른 세포내 발현 단백질체 분석
약물대사효소의 발현을 조절하는 핵수용체의 기능성 변이유전자 탐색 및 검색
핵수용체 발현의 개인차에 따른 약물반응 다양성 연구
유전자를 도입한 세포모델 및 in vitro 시험을 통한 핵수용체의 기능평가
약물반응의 다양성을 보이는 인체시료에서 핵수용체 및 약물대사효소의 발현량을 실시간 PCR법 및 면역조직학적 방법으로 측정 및 상관성 연구
유전형이 다른 개인에서 약물대사효소 유도제에 대한 반응의 차이를 평가
단백질체학적 접근을 통한 새로운 약물대사유전체 타겟 발굴 및 작용기전 연구
약물처리에 따른 단백질 변형에 관한 연구
: 약물대사효소의 발현을 조절하는 신호전달체계를 단백질 변형 (인산화/탈인산화, 아세틸화/탈아세틸화, 메틸화)분석
약물처리에 따라 변형된 단백체의 분석을 통해 약물에 의해 변형되는 단백을 2-D 전기영동법을 이용하여 분리하고 MALDI-TOF등의 MS를 이용하여 동정
약물대사효소 발현을 조절하는 신호전달체계에서 발견된 변형 단백질의 기능 분석
약물처리에 따른 단백질 상호작용에 관한 연구
약물대사효소의 발현에 핵심적인 PXR, CAR, LXR 등의 핵수용체에 FLAG 표지를 연결한 재조합 단백을 제작한 후 세포주에 발현시키고 과발현 세포주 제조
세포주를 대량배양하여 각 약물수용체의 리간드를 처리한 후 affinity chromatography를 이용하여 수용체와 결합하는 단백 및 단백복합체 분리, 동정
